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3047798688@qq.com因靈敏性和特異性高，使用PCR技術(shù)的核酸檢測成為新冠病毒檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但近期多地開展的大規(guī)模核酸篩查工作中，還是出現(xiàn)了多起由第三方檢測機構(gòu)引發(fā)的“假陽性”事件。
多名接受第一財經(jīng)采訪的專家和檢測行業(yè)人士均表示，PCR核酸檢測技術(shù)已經(jīng)相對成熟，出現(xiàn)“假陽性”并不意味著“金標(biāo)準(zhǔn)”失靈。但現(xiàn)階段，在采樣環(huán)節(jié)和檢測環(huán)節(jié)，影響核酸檢測結(jié)果的因素還有很多，比如耗材質(zhì)量不達標(biāo)、試劑盒靈敏度不高，包括不同廠商的試劑盒判定陽性的Ct值略有差異等因素，以及實驗室檢測機器維護不到位、標(biāo)本取材時被污染、樣本存放的溫度和時間不合格、檢測過程不規(guī)范等人為因素，都可能對檢驗結(jié)果造成影響，造成“假陽性”出現(xiàn)。
“不過，對于同一檢測機構(gòu)數(shù)次出現(xiàn)多個‘假陽性’樣本的現(xiàn)象，需要引起社會和政府部門的高度警覺。尤其是在大城市進行區(qū)域核酸篩查和流調(diào)溯源工作時，由于人口基數(shù)大，即便是小概率事件，也會波及一定規(guī)模的人群?；诖耍O(jiān)管人員應(yīng)該進一步深入實驗室環(huán)節(jié)，壓實責(zé)任，堵住各項風(fēng)險點。” 復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院教授姜慶五在接受第一財經(jīng)采訪時稱。
4月15日，工作人員在核子華曦核酸檢測方艙實驗室的樣本暫存間忙碌。新華社
不止一起“假陽性”發(fā)生了
目前，國內(nèi)外實驗室普遍采用的核酸檢測方法是熒光PCR法。“PCR”是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡稱，在該種檢測方式下，實驗室人員需要通過使用化學(xué)物質(zhì)從樣本中提取病毒RNA，再將該RNA轉(zhuǎn)化為DNA。為了檢測病毒，DNA的微小片段被放大，并在一些特殊熒光染料的幫助下，讓樣本擴增，最終根據(jù)熒光的亮度來識別陽性或陰性。
單就方法論而言，PCR檢測技術(shù)可靠性高，是國內(nèi)外公認(rèn)的新冠病毒檢驗的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心副主任李金明在3月15日的國務(wù)院聯(lián)防聯(lián)控機制發(fā)布會上曾表示，核酸檢測在方法學(xué)上特異性是100%。也就是核酸檢測在方法學(xué)上沒有假陽性，做的就是真的。
但是，假陽性發(fā)生了不止一起。
4月23日，安徽合肥發(fā)布通告，對兩家核酸檢測機構(gòu)合肥和合醫(yī)學(xué)檢驗實驗室與合肥諾為爾醫(yī)學(xué)檢驗實驗室給予警告并暫停合作的通報。
根據(jù)通報，上述兩家單位在蜀山區(qū)區(qū)域核酸檢測中，超能力承攬檢測業(yè)務(wù)、嚴(yán)重超過承諾時間出具檢測報告，影響合肥市對疫情形勢及時研判，更為嚴(yán)重的是，此前已多次發(fā)生類似情況，有的還幾次出具“假陽性”報告，嚴(yán)重干擾了合肥疫情防控大局。
5月9日，北京市衛(wèi)生健康委員會副主任、新聞發(fā)言人李昂在新聞發(fā)布會上表示，在近期的飛行監(jiān)督檢查中發(fā)現(xiàn)，個別核酸檢測機構(gòu)存在送檢不及時、報告不準(zhǔn)確、實驗室管理不嚴(yán)格等問題，嚴(yán)重影響核酸檢測質(zhì)量和疫情防控工作效果。
多名受訪人士稱，面對區(qū)域散發(fā)或規(guī)模性疫情，核酸檢測工作環(huán)節(jié)繁復(fù)，在采樣和檢測環(huán)節(jié)，均存在引發(fā)“假陽性”樣本出現(xiàn)的可能性。
實驗室環(huán)節(jié)是主要風(fēng)險點
實驗室環(huán)節(jié)是形成“假陽性”的主要風(fēng)險點。
根據(jù)PCR檢測流程，一份樣本從進入實驗室到出結(jié)果，需要經(jīng)過標(biāo)本前處理、核酸提取、加樣上機擴增、結(jié)果分析等多個環(huán)節(jié)。
廣西華銀醫(yī)學(xué)檢驗所臨檢實驗室主任李旺在接受第一財經(jīng)采訪時表示，從核酸提取到擴增的全過程，每板檢測都會有陰性或陽性質(zhì)控品，起質(zhì)量控制參照的作用，而這一過程中，陽性質(zhì)控品可能受到污染。
“比如，在對標(biāo)本進行前處理，要一個個擰開蓋子，用加樣槍吸取標(biāo)本進行核酸提取，在加樣或者點樣過程中，就有可能造成邊上的孔被污染，標(biāo)本一旦被濺到或者被污染到，后面上機檢測進行擴增的時候，即便只是極少的一點DNA片段，都可能造成陽性的結(jié)果。”李旺稱。
4月7日，檢測技師在進行核酸檢測工作。新華社
環(huán)境污染也是形成“假陽性”的重要實驗室原因。李旺稱，如果實驗室在防污染方面沒有做到位，那可能實驗室本身就已經(jīng)存在污染，在這樣的環(huán)境中進行檢測，就有可能造成假陽性。
另外，有專家指出，目前主流熒光PCR法，其陽性質(zhì)控物等的擴增產(chǎn)物若處理不當(dāng)極易形成氣溶膠污染實驗環(huán)境從而出現(xiàn)假陽性，且短期內(nèi)很難清除，這一問題表面上可通過更換不同的試劑予以解決，但目前新冠試劑大多都采用相同的引物探針序列，擴增區(qū)域大同小異，因此實際上也不能很好的解決擴增產(chǎn)物污染問題。
業(yè)內(nèi)其實早已注意到該問題。在已發(fā)布的《車載核酸檢測生物安全實驗室》標(biāo)準(zhǔn)中就明確規(guī)定，必須同時配備核酸DNA和RNA兩種檢測體系的試劑和相應(yīng)配套設(shè)備，在作業(yè)現(xiàn)場時第一時間對疑似結(jié)果進行復(fù)測，排除只采用PCR可能引起的假陽性。此方式當(dāng)然同樣適用于常規(guī)新冠核酸檢測場景。
為減少人員操作不當(dāng)引起的質(zhì)控品污染或環(huán)境交互污染等現(xiàn)象，在第三版《區(qū)域新型冠狀病毒核酸檢測組織實施指南》中提到，嚴(yán)格落實實驗室準(zhǔn)入和人員準(zhǔn)入要求，制定實驗室標(biāo)準(zhǔn)化流程，嚴(yán)防實驗室污染和實驗室內(nèi)交叉感染。
除了人為因素外，一名地方疾控中心檢驗科的檢驗人員還對第一財經(jīng)透露，實驗室耗材質(zhì)量不達標(biāo)也可能造成“假陽性”。
他舉例稱，八連管是核酸檢測試劑的必備耗材，如果八連管質(zhì)量不好，比如封蓋沒封緊或者受熱性不好，在加熱過程中出現(xiàn)融化、體積變化、漏蓋等情況，均會影響樣本的熒光度，進而導(dǎo)致“假陽性”。
在實驗室結(jié)果分析環(huán)節(jié)，檢驗設(shè)備的超負荷運作和試劑盒靈敏度不高也會出現(xiàn)檢測結(jié)果的“假陽性”。
上述檢測人員表示，當(dāng)實驗室檢測機器長時間、高頻率運作或者未能及時維護到位，檢測結(jié)果或存在不精準(zhǔn)，乃至出現(xiàn)“假陽性”。
檢測試劑盒也是一個需要關(guān)注的因素。該檢測人員稱，即便目前用于PCR檢測的試劑盒準(zhǔn)確度都不低，好一點的可能在99%點幾的水平，稍差一點的也在95～99%的區(qū)間，但卻鮮有生產(chǎn)商可以確保100％的準(zhǔn)確率。
另外，因為不同第三方檢驗機構(gòu)選擇的核酸檢測試劑盒來自不同廠商，而不同廠商的試劑盒判定陽性的Ct值可能略有差異。比如，思路迪試劑Ct值小于等于39.5判定為陽性；而伯杰試劑則是以Ct值小于等于40判定為陽性。
受此影響，Ct值處于臨界值附近的人群，可能會因為負責(zé)該樣本的檢驗機構(gòu)不同，結(jié)果也不同，即有的檢測結(jié)果為弱陽性，有的則為陰性的。而由第三方檢測機構(gòu)判定為弱陽性的人群，也有可能在相關(guān)醫(yī)院復(fù)核后檢測結(jié)果為陰性。
“即使是同一個試劑盒，如果CT值處于臨界點，也可能出現(xiàn)這次測出來是陽性、下次測出來是陰性的現(xiàn)象。”李旺補充稱。
思路迪試劑和伯杰試劑都經(jīng)過藥監(jiān)部門的規(guī)范審批，不過思路迪試劑屬于快檢試劑，且是快檢試劑中較快的一類，僅45分鐘就會出結(jié)果，復(fù)檢試劑伯杰屬于正常試劑，要90分鐘才能出結(jié)果。
有專家表示，快檢試劑的優(yōu)勢是“快”，比一般的試劑要提高近40%的產(chǎn)能，即同樣的樣本檢測時間是4小時，用快檢試劑，兩個多小時即可出結(jié)果。但有些快檢試劑的問題是，相對于正常的試劑，“假陽性率會略高”。
采樣環(huán)節(jié)也有隱患
雖然實驗室是造成核酸結(jié)果“假陽性”的主要環(huán)節(jié)，但在核酸采樣時同樣存在隱患。
病毒性專家常榮山還對第一財經(jīng)表示，根據(jù)采樣標(biāo)準(zhǔn)，采樣人員配戴的面屏應(yīng)每檢一次就要消殺一次，但由于時間緊、任務(wù)重，在實際工作中，常常難以做到。
“在此背景下，被采人如果是陽性感染者，其近距離呼出的氣溶膠可能粘在采樣人員的塑料面屏上，當(dāng)面屏上的病毒量足夠多，并在短時間內(nèi)轉(zhuǎn)移到采樣人員的手上，再觸碰到下一個被采人的采樣管壓蓋上，也會帶來污染，測出’假陽性’。”常榮山稱。
同時，“新冠疫苗會導(dǎo)致采樣的’假陽性’”，李旺稱，如果剛打了疫苗就采樣或者核酸采樣點距離疫苗接種點比較近，都有可能造成結(jié)果假陽性，這是采樣環(huán)節(jié)中比較常發(fā)生的。
對于采樣、檢測等環(huán)節(jié)的風(fēng)險，該如何壓實責(zé)任，堵住各項風(fēng)險點？
第三方實驗室：加強質(zhì)量監(jiān)管監(jiān)管
面對實驗室檢測環(huán)節(jié)存在的多個質(zhì)量控制風(fēng)險點，多名受訪人士稱，如何監(jiān)管、落實已有的實驗室標(biāo)準(zhǔn)是降低“假陽性”發(fā)生率的關(guān)鍵。
“對于進行檢測的實驗室，在實驗前要先對實驗室進行清潔消毒，實驗后也要做好清場，盡量防止實驗室污染。最后，檢測人員最好使用獨立的加樣槍去加陽性質(zhì)控品，同時提高防污染意識，避免把陽性質(zhì)控品不小心濺到隔壁的其他樣本中。”李旺稱。
由于近期曝光的多例大批量“假陽性”事件均和第三方檢測機構(gòu)有關(guān)，姜慶五還建議，各地臨床檢驗中心需要進一步細化對第三方檢測機構(gòu)的監(jiān)督方法，同時加大對其監(jiān)管頻次和強度。“比如，當(dāng)臨床檢驗中心在對第三方檢測機構(gòu)抽查時，可以放一批盲樣，讓這些機構(gòu)現(xiàn)場給出結(jié)果，進而更客觀地判定該機構(gòu)檢測的假陽性率。”
李昂在5月9日的發(fā)布會上就表示，北京市衛(wèi)健委依法依規(guī)，對涉事核酸檢測機構(gòu)進行嚴(yán)肅處理。第一時間同機構(gòu)法定代表人進行誡勉約談，要求切實開展深入檢查和分析，認(rèn)真查找問題原因，嚴(yán)防出現(xiàn)質(zhì)控管理方面的系統(tǒng)性問題；要求該機構(gòu)暫停執(zhí)業(yè)活動，停止承接新冠病毒核酸檢測業(yè)務(wù)，根據(jù)進一步調(diào)查情況依法依規(guī)進行處理。
同時開展全市核酸檢測機構(gòu)監(jiān)督檢查。加強協(xié)作，形成安全質(zhì)量監(jiān)管合力。強化行業(yè)管理和溝通協(xié)調(diào)，聯(lián)合藥監(jiān)、公安等部門建立核酸檢查質(zhì)量聯(lián)合監(jiān)管工作機制，開展“亮劍”專項治理行動，進一步加強新冠病毒核酸檢測實驗室質(zhì)量監(jiān)管，完善工作流程，加強過程審核把關(guān)等。
最后也實施可疑病例和陽性樣本檢測全流程追溯，對核酸檢測工作規(guī)范、質(zhì)量把關(guān)嚴(yán)的機構(gòu)予以通報表揚，核酸檢測任務(wù)給予傾斜，對核酸檢測質(zhì)量不符合標(biāo)準(zhǔn)的機構(gòu)，進行通報批評，依法依規(guī)調(diào)查處理。
加強復(fù)核：避免給所涉群體帶來不必要損失
另外，核酸檢測結(jié)果的復(fù)核工作顯得尤為關(guān)鍵。
在復(fù)核操作層面，常榮山提出三點建議：其一，可以.換個采樣部位，從鼻子換到咽部，或者從咽部換到鼻子，進行采樣；其二，換成不同廠家的試劑重做；其三，采樣血清樣本，檢測IGM，如果是陽性，陽性值還比較高，說明還處于感染期，或者感染后期。
由于核酸檢測“假陽性”并非0概率事件，多名受訪人士還稱，在區(qū)域大規(guī)模核酸檢測中，應(yīng)該確保復(fù)檢流程的規(guī)范性，并最大可能降低人力、物力成本，避免出現(xiàn)額外的病毒傳播現(xiàn)象。
金域醫(yī)學(xué)方面向第一財經(jīng)表示，在實驗室完成檢測后，第三方檢測機構(gòu)會按照衛(wèi)健委的操作指南，將碰到疑似陽性的樣本需要直接報給疾控部門，由疾控部門復(fù)檢后出具報告。
根據(jù)第三版《區(qū)域新型冠狀病毒核酸檢測組織實施指南》，如果是單采樣本檢測結(jié)果陽性時，需通知120負壓救護車進行陽性感染者轉(zhuǎn)運；通知集中隔離管理設(shè)施準(zhǔn)備接收該陽性感染者；通知陽性感染者所在社區(qū)（小區(qū)）找到并控制該陽性感染者；通知公安機關(guān)協(xié)助進行陽性感染者轉(zhuǎn)運，并開展該陽性感染者軌跡排查；通知疾控部門開展后續(xù)的流調(diào)溯源、密接排查和社區(qū)封控等工作。
如果是混采檢測陽性時，則需立即原地隔離所涉人員并進行單采復(fù)核?；觳申栃詥尾蓮?fù)核要求鼻咽、口咽雙采單檢?；觳蓹z測陽性處置工作應(yīng)在6小時內(nèi)完成。
“但在實際落地過程中，各地對于混采陽性的情況，處置方式可能也略有差異。比如，有的地區(qū)可能會將相關(guān)人員送至隔離酒店等待結(jié)果，有的則可能直接被送至方艙醫(yī)院。”上述地方疾控中心檢測人員稱。
姜慶五稱，如果不能區(qū)分對待混采檢測陽性和單采檢測陽性人員，這不僅是在流程上不符合規(guī)范，還會給所涉群體帶來不必要的損失，需要引起重視。
“尤其是在抗原檢測推廣后，一部分人群可能在混采檢測中核酸檢測為弱陽性，但自身抗原檢測為陰性，在這一群體中就存在‘假陽性’的可能性。對此，復(fù)檢工作流程標(biāo)準(zhǔn)化、操作精準(zhǔn)化很關(guān)鍵。” 姜慶五稱。
